Количественные методы белок в моче. Определение концентрации белка в моче методом разведения

Когда в моче повышен белковый показатель, такая ситуация вызывает настороженность у взрослого человека. Неудивительно, ведь протеинурия считается маркером проблем с почками. Норма белка в моче – это когда его нет вообще либо определяется незначительное количество протеинов. О чем говорит превышение допустимых отклонений показателей?

Кому и зачем назначают обследование на протеинурию?

Когда может понадобиться анализ на белок в моче? Причин для такого исследования есть несколько. Например, если врач обнаружит у пациента такие симптомы нефропатии, как отек ног, набор веса, уменьшение количества урины, повышенную утомляемость, гипертонию, анализ на содержание белка в моче поможет подтвердить диагноз. Обследоваться периодически необходимо людям, которые входят в категорию риска развития хронической дисфункции почек. Контроль белка в моче позволяет вовремя обнаружить ХПН. К факторам риска относится наследственность, пожилой возраст, курение, ожирение, болезни почек. При сахарном диабете, а также иных системных болезнях (волчанке, амилоидозе), которые негативно влияют на почки, также периодически проводят анализ на наличие белка в моче. По нему можно оценить степень поражения органа.

Необходимо такое исследование, когда для лечения каких-то заболеваний назначают нефротоксические препараты. Анализ на повышенный белок в моче помогает понять, насколько почки нормально функционируют. Многие препараты, в том числе и обычный аспирин с пенициллином, способны повредить почки. Если после назначения лекарств обнаруживают белок в анализе мочи, следует скорректировать терапию. Данный анализ помогает диагностировать первичные гломерулопатии, липоидный нефроз, мембранозный гломерулонефрит и схожие патологии, провоцирующие повышенное содержание белков в моче.

Исследование биоматериала на протеины

Методы определения белка в моче подразделяют на качественные, количественные, полуколичественные. Качественные применяют для скрининга, так как их результаты не особо надежные. Основаны такие методики на свойствах протеинов к денатурации при химических и физических воздействиях. Во время качественного определения белка в моче образец должен быть прозрачным, иначе присутствие белкового осадка сложно будет различить. Если образец мутный, в него добавляют тальк либо магнезию и фильтруют. Наиболее распространенные качественные анализы – методика Геллера, реакция с сульфосалициловой кислотой.

Полуколичественным является унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова и экспресс-методы. Удобны они тем, что позволяют легко определить высокое содержание протеинов в моче в домашних условиях. Образец собирается по правилам, затем в него опускают специальные тест-полоски. Проверяется либо суточная моча на белок, либо разовая порция. Оценивают результат по цветовой шкале или с помощью анализатора.

Количественное определение белка в моче предпочтительнее, но требуют соблюдения множества специфических условий. Поэтому и такие пробы нередко дают ложные результаты. Наиболее точными считаются колориметрические пробы, которые базируются на цветовых реакциях белковых структур. Это биуретовый метод, тест Лоури, метод ПКГ (реакция с пирогаллоловым красным). Практически все количественные пробы для определения белка в моче чувствительны только к альбуминам. Наличие глобулинов, мукопротеинов либо структур Бенс-Джонса такое исследование не покажет. Поэтому если анализ на общий белок в моче отрицательный, но врач подозревает патологию, назначают дополнительные диагностические процедуры. Для выявления разных типов протеинов используют иммунохимические исследования и эректрофорез.

Несмотря на то, что и общий анализ мочи (ОАМ), проведенный по разовой утренней порции может показать наличие протеинов, для обнаружения патологии почек рекомендуется исследовать суточный белок в моче. Связано это с тем, что в течение дня выделение протеинов колеблется, и диурез влияет на их концентрацию. Если нет возможности сдать суточный анализ мочи на белок, рекомендуется провести расчет в разовой порции соотношения протеина с креатинином, поскольку он постоянно выделяется с одинаковой скоростью. Преимущество такой диагностики еще и в том, что исключаются ошибки, связанные со сложностями самостоятельно правильно собрать суточную мочу.

Расшифровка результатов

Если при проведении исследования обнаружен белок в моче, что это значит? О чем говорят различные показатели? Хотя именно отсутствие белка в моче считается нормой (в бланке отмечается обозначением abs), небольшое его содержание – это не повод бить тревогу. Необходимо смотреть на клиническую картину в целом.

Референсные значения при исследовании разовой утренней порции – до 0,15 г/л. При оценке суточной протеинурии в состоянии покоя пациента показатель не должен превышать 0,14 г/сут. Если имела место повышенная физическая нагрузка, то допустимой считается концентрация до 0,3 г/сут.

Превышение данных показателей классифицируется, как протеинурия (альбуминурия). При измерении суточной экскреции по степени выраженности различается:

Физиологическое превышение или следы белка в моче – до 300 мг/сут.
Низкая суточная потеря белка – до 500 мг/сут.
Протеинурия умеренная – до 3 г/сут.
Выраженная экскреция протеинов – более 3 г/сут.

Мизерный объем белка в общем анализе мочи не всегда определяется, поэтому при жалобах пациента и характерных симптомах рекомендуется более тщательная диагностика. Для соотношения белок-креатинин в моче нормой считается показатель 0,2. Полное отсутствие либо крайне низкий уровень белка в моче не несет диагностического значения.

Почему в анализе может появляться протеин?

Содержание белковых структур в мочевой жидкости зависит от всасывания почечных канальцев, особенностей кровообращения и состояния гломерулярной фильтрационной системы. Причины протеинурии связаны с нарушением этих механизмов, чаще это происходит под влиянием физиологических факторов и лишь в 2% всех случаев выявления протеинов причиной являются заболевания почек или другие серьезные патологии. Именно снижение способности парного органа к нормальной фильтрации приводит к превышающей норму экскреции белковых элементов в мочевыводящие пути. Появляется белок в моче при следующих проблемах с почками:

липоидном нефрозе, гломерулонефритах, синдроме Фанкони, при пиелонефрите, гломерулярном склерозе, иных первичных почечных патологиях;
повреждении почек при гипертензии, преэклампсии, злокачественных опухолях, сахарном диабете, системных патологиях соединительной ткани, пр.;
нарушении функции почек из-за отравления свинцом или ртутью;
камнях в почках;
почечной карциноме – раке органа;
поражении почечной тканей при нефротоксичной терапии;
воспалении почек из-за простуды, вызванной сидением на холодной поверхности.

Почему белок в моче может появиться, когда нет проблем с почками? Протеинурия может быть связана с гиперфункцией щитовидной железы, мочекаменной болезнью, сердечной патологией, различными травмами, инфекциями выделительной системы. Экскреция белка с мочой возможна при поражении ЦНС, запущенной пневмонии, гастрите, гестозе у беременных, туберкулезе у пожилых людей.

Протеинурия иногда возникает из-за увеличенного образования белковых структур в организме. Превышение концентрации протеинов вызывает миеломная болезнь, повреждение мышц, гемоглобинурия, макроглобулинемия. Причины появления белка в моче могут быть вполне безобидными. Такую протеинурию называют физиологичной или временной, потому что она проходит без лечения. Например, при сильной нагрузке у спортсменов может быть обнаружено много белка в биоматериале (маршевая протеинурия). Транзиторное увеличение показателей случается при фимозе у мальчиков, аллергии, переохлаждении, глистах, после операции в области брюшной полости, а также после гриппа либо ОРВИ. Положительная реакция на белок в моче проявляется после сильного стресса, при лихорадочных состояниях, обезвоживании, протеиновой диете, длительном голодании.

Диагностика

Различают виды протеинурии по патогенезу (механизмам образования), времени появления, степени выраженности, локализации источника патологии. Все они описаны в Международной классификации болезней. Повышение белка в мочевой жидкости имеет код МКБ-10 R80. По месту развития патологических процессов выделяется:

Протеинурия преренальная – распад белковых структур усиленно протекает в тканях либо активно разрушаются эритроциты, секретируя большое количество гемоглобина.
Протеинурия ренальная – патология наблюдается в почечных канальцах и клубочках. Если поврежден именно гломерулярный фильтр – это протеинурия клубочковая. При неспособности канальцевой системы почек реабсорбировать альбумины из плазмы крови говорят о протеинурии тубулярной.
Протеинурия постренальная – диагностируется при болезнях нижних отделов мочевыделительной системы (мочевого пузыря, уретры, половых органов, мочеточника).

Дифференциальная диагностика протеинурии между тубулярной и клубочковой формами проводится на основании количества обнаруженного белка, а также сопутствующих симптомов. При поражении клубочков часто наблюдается выраженная протеинурия, которая сопровождается отеками тканей. При патологии канальцев экскреция альбуминов не так выражена. Для уточнения диагноза смотрят и на такие параметры урины, как лейкоциты, эритроциты, бактерии, слизь, сахар, нитриты.

По тому, какие именно белковые структуры проникают в мочу, протеинурия бывает селективной, когда выделяются в биоматериал исключительно альбумины и другие микропротеины. При протеинурии неселективной в образце, кроме низкомолекулярных, появляются структуры со средней и высокой молекулярной массой (глобулины, липопротеиды).

Чтобы диагностика была достоверной, важно соблюдать правила сбора образца и подготовки к анализу, зависят они от назначенного метода исследования.

Люди часто интересуются, что нельзя есть перед сдачей мочи? На самом деле, особых ограничений по продуктам нет, разве что не рекомендуется обильное белковое питание. В течение суток перед тем, как собирать биоматериал, нельзя употреблять алкоголь. На результаты также влияет прием некоторых препаратов (антибиотиков, аспирина) и неправильно собранный биоматериал. Мочегонные средства нельзя использовать в течение 2-х дней перед анализом.

Сама по себе протеинурия не дает оснований для постановки диагноза, чтобы уточнить причины выделения белка с мочой, необходимы дополнительные анализы, инструментальная диагностика и сбор анамнеза.

Симптомы и риски протеинурии

Дефицит различных протеинов в организме может не ощущаться, если их потеря невелика. Когда же обнаружено белка в моче достаточно много, этот процесс сопровождается характерными симптомами протеинурии:

отеками тканей, особенно в области нижних конечностей и лица;
снижением онкотического кровяного давления;
асцитом – скоплением жидкости в брюшной полости;
слабостью в мышцах, ощущением ломоты в костях;
сонливостью, головокружением;
тошнотой, ухудшением аппетита;
неприятным запахом урины (в случае опухоли мочевого пузыря, например, моча пахнет тухлым мясом).

Каждое состояние, при котором в мочевой жидкости повышен белок, имеет специфические признаки. Например, для диабета характерно повышенное давление, жажда, частое мочеиспускание. При гестозе нередко повышенное количество белка в моче сочетается с низким уровнем гемоглобина.

Чем опасен избыток экскреции в мочу белка? При большой потере различных видов протеинов могут проявиться достаточно тяжелые осложнения. К таковым относится повышение свертываемости крови, тромбоз, снижение сопротивляемости к инфекциям, атеросклероз, плохое заживление ран, снижение функции щитовидной железы, аномальное повышение липидов и нехватка кальция в крови, пр.

Что делать, если белковые показатели выше нормы?

Как уменьшить белок в моче? Это закономерный вопрос для тех, кто столкнулся с такой проблемой. Важно понимать, что выбор лечебных мероприятий зависит от того, что является первопричиной высокого белка. Если всему виной почечная патология или другое серьезное заболевание, лечить пациента должны профессионалы. Никакими народными средствами в таких ситуациях увлекаться не стоит без консультации с врачом. Из препаратов, снижающих уровень протеинов, применяют цитостатики, кортикостероиды, антиагреганты, антибактериальные таблетки в случае инфекции. Для лечения протеинурии у детей и беременных используют более безопасные препараты, например, канефрон на травах. Если появление белка в моче временное, лечение специальное не требуется.

Как избавиться от белка в моче, если причины не патологические? В первую очередь следует подумать не о препаратах, а о диете, которая способна понизить нагрузку на почки. Полезно будет убрать из рациона тяжелые белковые продукты животного происхождения, лучше кушать растительные протеины. Снизить белок в моче помогут проверенные народные рецепты. Хорошие белково- выводящие свойства показывает клюква. Из ягоды можно делать морсы или кашицы. Настои из петрушки, березовых почек, липы с лимоном также способны оказать благоприятное воздействие на почки и вывести белок из мочи. Применяют в этих целях и продукты пчеловодства.

Важно осознать, что эффективность лечения напрямую зависит от своевременной диагностики, поэтому врачи рекомендуют хотя бы раз в год сдавать анализ мочи на протеины в качестве профилактики.

Моча - это важная биологическая жидкость в организме человека. Большая часть продуктов обмена удаляется именно с ней. У здорового человека ее состав имеет относительно фиксированные значения. При возникновении заболевания некоторые показатели изменяются, что дает возможность лечащим врачам уточнить поставленный диагноз. Выявить проблемы в работе почек поможет анализ суточной мочи на белок.

Анализ суточной мочи или суточный диурез

Это лабораторное исследование, с помощью которого определяют количество выделившейся жидкости за сутки. Такой метод применяется для оценки состояния функционирования почек. Состав урины:

Каждого компонента в норме должно содержаться определенное количество, отклонение от которого считается патологией. При исследовании суточного на белок норма для взрослых мужчин и женщин одинаковая. При нормальной работе почек это вещество не должно попадать в урину или его может содержаться незначительное количество 40-80 мг. Выделение 150 мг и более считается патологией. Однако с возрастом, особенно после 60 лет, допускается небольшое превышение допустимого показателя, и связано это с возрастными изменениями в организме. В некоторых случаях выявление белка объясняется неправильной подготовкой перед сбором биоматериала или погрешностями в питании. У детей норма зависит от возраста, веса и площади поверхности тела.

Общая информация

По результатам лабораторных исследований суточной урины получают следующие сведения:

Объем жидкости, который выделяется в течение суток из организма. В среднем, он составляет 1750 мл и может колебаться как в меньшую, так и в большую сторону в зависимости от объема выпитой жидкости.
Сахар. Особенно важен этот показатель для пациентов, страдающих сахарным диабетом.
Оксалаты. Превышение сверх допустимых границ чревато образованием в почках песка и камней.
Метанефрин. Это вещество образуется после распада гормонов. Отклонения от нормы в сторону увеличения - это признак патологии почек, сердечно-сосудистой системы и др.
Белок. У здоровых людей этого показателя не должна наблюдаться в урине. Это один из важных параметров, который выявляется при суточном анализе мочи. Завышенный уровень свидетельствует о признаках патологии почек, болезнях центральной нервной системы. Помимо общего количества белка, лабораторное исследование биологической жидкости позволяет обнаружить и белковые соединения, которые также важны для правильной постановки диагноза.

Показания к назначению анализа суточной мочи на белок

Ввиду того что изменения в качественном и количественном составе урины начинаются раньше, чем симптомы болезни, анализ позволяет своевременно выявить патологию. Показаниями к назначению этого вида исследований у взрослых и детей является наличие следующих заболеваний:

амилоидоза (нарушение обмена белков);
сахарного диабета;
нефропатии, которая проявляется отеками ног;
ишемии сердца;
почечной недостаточности.

Кроме того, его назначают при приеме пациентом некоторых лекарственных средств: аминогликозидов, ингибиторов АПФ, диуретиков тиазидного ряда и некоторых других препаратов.

Подготовительный этап

Для большей информативности и получения наиболее объективной информации по итогам анализа суточной мочи на белок следует соблюдать определенные правила, которые обязательны для выполнения и заключаются в следующем:

За сутки или более исключить употребление витаминных комплексов, антикоагулянтов и диуретических средств.
За сутки изменить рацион. Отказаться от острой, жирной и сладкой пищи, а также алкогольных и кофейных напитков.
Не сдавать биоматериал во время месячных.
Для сбора урины приобрести в аптечном учреждении специальную тару или можно воспользоваться стеклянной банкой, объемом не менее трех литров.

на анализ белка?

Правила сбора биоматериала общие как для взрослых мужчин, так и для женщин и детишек, которые достигли определенного возраста и могут самостоятельно пользоваться горшком.

Непосредственно перед сбором урины необходимо выполнить туалет наружных половых органов.
Первая порция биоматериала не учитывается. Однако фиксируется время утреннего мочеиспускания.
Собирают всю выделяемую жидкость в течение 24 часов. В ночное время также продолжается сбор урины.
Тару с биоматериалом рекомендуется хранить при температуре не выше 8 градусов и не ниже 5.
Сразу после забора последней порции, собранную мочу следует тщательно перемешать.
Предварительно у доктора следует уточнить, как сдавать суточный анализ мочи на белок в лабораторию. Существует два способа. Около 100 мл биоматериала отливают в емкость маленького размера и относят в лабораторию или можно доставить весь суточный объем в большой таре.
В случае, когда имеет значение изменение диуреза за сутки, то доктор рекомендует фиксировать объем любой потребляемой жидкости в течение 24 часов.

Как собирать суточный анализ мочи на белок детям до года? Такой вопрос интересует молодых мамочек. При назначении подобного исследования малышам, педиатры советуют приобрести специальное устройство для сбора биоматериала, которое свободно продается в аптеках. Не следует выжимать жидкость из подгузников или ловить момент, когда малыш захочет помочиться.

Протеинурия или белок в суточной моче

Таким термином обозначают высокие показатели белковых веществ в урине. С ее помощью отслеживают работу почек. Различают протеинурию следующих видов. Легкая - не является предвестником заболеваний и возникает по естественным причинам. Умеренная и выраженная - эти виды свидетельствуют о проблемах в работе почек. В этих случаях, кроме белка в суточном анализе мочи, присутствуют такие симптомы, как:

боли в костях;
головокружение;
потеря аппетита;
сонливость;
тошнота;
рвота;
сильная утомляемость.

Причины появления белка в урине:

сердечная недостаточность;
болезни центральной нервной системы;
гипертиреоз;
инфекционный эндокардит.

На изменение состава урины указывает ее оттенок, появление белесоватого окрашивания — это признак присутствия альбумина, вещества белковой природы.

Типы протеинурии

Основным фактором, оказывающим влияние на появление в урине белковых соединений, являются неполадки в усвоении этого вещества. Различают протеинурию:

Канальцевую. При некоторых заболеваниях невозможно или затруднительно всасывание белков.
Клубочковую. В этом случае белковые молекулы не задерживаются и вместе с жидкостью выводятся. Такое явление характерно при следующих патологиях: пиелонефрит, повреждение почек токсинами, гломерулонефрит.
Экстраренальная. Присутствуют повреждения мочевыводящих путей, характерные для уретритов, кольпитов и циститов.

Для определения типа протеинурии применяется ее микроскопическое исследование. Далее, при необходимости доктор назначает и другие виды обследований, включающие ультразвук, магнитно-резонансную томографию и другие аппаратные методы.

Белок в моче при беременности. Причины

Белок - это строительный материал, принимающий участие в различных процессах в организме индивида. Выявление его в урине считается признаком развития патологических процессов. Почечные тельца теряют целостность и вместе с вредными веществами в мочу попадает белок, а причиной такого сбоя является воспалительный процесс в почках. Анализ урины позволяет своевременно распознать болезнь, удостовериться в правильной работе почек в самый ответственный и важный период в жизни женщины. Любое, даже самое незначительное выявление белка у беременных в суточном анализе мочи - это признак начала развития патологии. Причинами его появления являются следующие заболевания:

гломерулонефрит;
красная волчанка;
нефрит;
гипертония;
диабет сахарный.

А также инфекционные и воспалительные процессы в почках, их травмы механической природы, ожоги, переохлаждения, отравления токсическими веществами или лечение злокачественных новообразований химиотерапевтическими препаратами до наступления беременности.

Безопасная беременность

С целью диагностики заболеваний почек используют простой метод - это суточной анализ мочи на белок. Соблюдение условий для правильного сбора мочи является обязательным для любой женщины в положении.

Наружные половые органы должны быть чистыми. Подмываться можно с использованием обычного мыла. Использовать антисептики или травяные сборы запрещено, так как они исказят достоверность результатов.
Собирают урину в чистую сухую тару с широким горлом.

В случае обнаружения в моче белка доктор назначает лечение, которое защитит плод от отрицательного влияния заболевания, ставшего причиной появления веществ белковой природы в урине. Далее следует выяснить причину этого явления. В большинстве случаев она кроется в нарушении работы почек. Появление белка в биоматериале во второй половине беременности - это один из симптомов гестоза. Затем присоединяются отеки, перепады артериального давления.

суточный анализ мочи на белок;
регулярное посещение доктора;
контроль за давлением;
питание, усиленное витаминными комплексами;
умеренное потребление жидкости;
отказ от специй и по возможности от соли или уменьшение ее количества до минимума.

С профилактической целью, а также для уменьшения белковых соединений в моче доктор может назначить лекарственные средства на растительной основе или отвары трав, обладающих мочегонным действием.

Лечение и профилактика

Расшифровку анализов следует доверить своему доктору. В случае выявления патологических причин появления белковых веществ в урине необходимую терапию назначает только медицинский работник. Не рекомендуется самостоятельно лечиться и увлекаться нетрадиционными методами. При выявлении причин, не связанных с патологическими процессами, уделяют особое внимание рациону. Важно помнить, что эффективность терапии зависит от своевременной диагностики.

Является одним из наиболее важных и постоянных признаков заболеваний почек и мочевых путей. Определение концентрации белка в моче является обязательным и важным элементом исследования мочи. Выявление и количественная оценка протеинурии важна не только в диагностике многих первичных и вторичных заболеваний почек, оценка изменения выраженности протеинурии в динамике несет информацию о течении патологического процесса, об эффективности проводимого лечения. Обнаружение белка в моче даже в следовых количествах должно настораживать в отношении возможного заболевания почек или мочевых путей и требует повторного анализа. Особо следует отметить бессмысленность исследования мочи и, в частности, определения белка мочи без соблюдения всех правил ее сбора .

Все методы определения белка в моче можно разделить на:

Качественные,
Полуколичественные,
Количественные.

Качественные методы

Все качественные пробы на белок в моче основаны на способности белков к денатурации под влиянием различных физических и химических факторов. При наличии белка в исследуемом образце мочи появляется либо помутнение, либо выпадение хлопьевидного осадка.

Условия определения белка в моче на основе реакции коагуляции:

Моча должна иметь кислую реакцию . Мочу щелочной реакции подкисляют несколькими (2 - 3) каплями уксусной кислоты (5 – 10%).
Моча должна быть прозрачной. Помутнение устраняется через бумажный фильтр. Если помутнение не исчезает, добавляют тальк или жженую магнезию (около 1 чайной ложки на 100 мл мочи), взбалтывают и фильтруют.
Качественную пробу следует проводить в двух пробирках, одна из них – контрольная.
Искать помутнение следует на черном фоне в проходящем свете.

К качественным методам определения белка в моче относятся:

проба с кипячением, и другие.

Как показывают многочисленные исследования, ни один из большого числа известных методов качественного определения белка в моче не позволяет получать надежные и воспроизводимые результаты. Несмотря на это, в большинстве КДЛ в России эти методы широко используются в качестве скрининга – в моче с положительной качественной реакцией в дальнейшем проводят количественное определение белка. Из качественных реакций чаще используют пробу Геллера и пробу с сульфосалициловой кислотой, однако пробу с сульфосалициловой кислотой большей частью считают наиболее подходящей для выявления патологической протеинурии. Проба с кипячением в настоящее время практически не используется в связи с ее трудоемкостью и длительностью.

Полуколичественные методы

К полуколичественным методам относятся:

определение белка в моче с помощью диагностических тест-полосок.

В основе метода Брандберга-Робертса-Стольникова лежит кольцевая проба Геллера, поэтому при данном методе наблюдаются те же ошибки, что и при пробе Геллера.

В настоящее время для определения белка в моче все чаще используются диагностические полоски. Для полуколичественного определения белка в моче на полоске в качестве индикатора чаще всего используется краситель бромфеноловый синий в цитратном буфере. О содержании белка в моче судят по интенсивности сине-зеленой окраски, развивающейся после контакта реакционной зоны с мочой. Результат оценивается визуально или с помощью анализаторов мочи. Несмотря на большую популярность и очевидные преимущества методов сухой химии (простота, скорость выполнения анализа) данные методы анализа мочи в целом и определения белка в частности не лишены серьезных недостатков. Одним из них, приводящих к искажению диагностической информации, является большая чувствительность индикатора бромфенолового синего к альбумину по сравнению с другими белками. В связи с этим, тест-полоски в основном приспособлены к обнаружению селективной гломерулярной протеинурии, когда практически весь белок мочи представлен альбумином. При прогрессировании изменений и переходе селективной гломерулярной протеинурии в неселективную (появление в моче глобулинов) результаты определения белка оказываются заниженными по сравнению с истинными значениями. Данный факт не дает возможности использовать данный метод определения белка в моче для оценки состояния почек (гломерулярного фильтра) в динамике. При тубулярной протеинурии результаты определения белка также оказываются заниженными. Определение белка с помощью диагностических полосок не является надежным индикатором низких уровней протеинурии (большинство выпускаемых в настоящее время диагностических полосок не обладают способностью улавливать белок в моче в концентрации ниже, чем 0,15 г/л). Отрицательные результаты определения белка на полосках не исключают присутствия в моче глобулинов, гемоглобина, уромукоида, белка Бенс-Джонса и других парапротеинов.

Хлопья слизи с высоким содержанием гликопротеидов (например, при воспалительных процессах в мочевых путях, пиурии, бактериурии) могут оседать на индикаторной зоне полоски и приводить к ложноположительным результатам. Ложноположительные результаты могут также быть связаны с высокой концентрацией мочевины . Плохое освещение и нарушение цветоощущения может быть причиной неточного результата.

В связи с этим, использование диагностических полосок следует ограничить скринирующими процедурами, а результаты, полученные с их помощью, следует рассматривать лишь как ориентировочные.

Количественные методы

Корректное количественное определение белка в моче в ряде случаев оказывается непростой задачей. Трудности ее решения определяются следующим рядом факторов:

низким содержанием белка в моче здорового человека, часто находящимся на пороге чувствительности большинства известных методов;
присутствием в моче множества соединений, способных вмешиваться в ход химических реакций;
значительными колебаниями содержания и состава белков мочи при различных заболеваниях, затрудняющими выбор адекватного калибровочного материала.

В клинических лабораториях преимущественно применяются так называемые «рутинные» методы определения белка в моче, однако они далеко не всегда позволяют получать удовлетворительные результаты.

С точки зрения специалиста-аналитика, работающего в лаборатории, метод, предназначенный для количественного определения белка в моче, должен отвечать следующим требованиям:

обладать линейной зависимостью между поглощением образовавшегося в ходе химической реакции комплекса и содержанием белка в пробе в широком диапазоне концентраций, что позволит избежать дополнительных операций при подготовке пробы к исследованию;
должен быть прост, не требовать высокой квалификации исполнителя, выполняться при малом количестве операций;
обладать высокой чувствительностью, аналитической надежностью при использовании небольших объемов исследуемого материала;
быть устойчивым к воздействию различных факторов (колебаниям состава образца, присутствию лекарственных препаратов и др.);
обладать приемлемой стоимостью;
быть легко адаптируемым к автоанализаторам;
результат определения не должен зависеть от белкового состава исследуемого образца мочи.

Ни один из известных к настоящему времени методов количественного определения белка в моче не может в полной мере претендовать на роль «золотого стандарта».

Количественные методы определения белка в моче можно разделить на турбидиметрические и колориметрические.

Турбидиметрические методы

К турбидиметрическим методам относятся:

определение белка с сульфосалициловой кислотой (ССК),
определение белка с трихлоруксусной кислотой (ТХУ),
определение белка с бензетоний хлоридом.

Турбидиметрические методы основаны на снижении растворимости белков мочи вследствие образования суспензии взвешенных частиц под воздействием преципитирующих агентов. О содержании белка в исследуемой пробе судят либо по интенсивности светорассеяния, определяемого числом светорассеивающих частиц (нефелометрический метод анализа), либо по ослаблению светового потока образовавшейся суспензией (турбидиметрический метод анализа).

Величина светорассеяния в преципитационных методах обнаружения белка в моче зависит от множества факторов: скорости смешивания реактивов, температуры реакционной смеси, значения pH среды, присутствия посторонних соединений, способов фотометрии. Тщательное соблюдение условий реакции способствует образованию стабильной суспензии с постоянным размером взвешенных частиц и получению относительно воспроизводимых результатов.

Некоторые лекарственные препараты влияют на результаты турбидиметрических методов определения белка в моче, приводя к так называемым «ложноположительным», либо «ложноотрицательным» результатам. К ним относятся некоторые антибиотики (бензилпенициллин, клоксациллин и др.), рентгеноконтрастирующие йодсодержащие вещества, сульфаниламидные препараты.

Турбидиметрические методы плохо поддаются стандартизации, часто приводят к получению ошибочных результатов, но, несмотря на это, в настоящее время они широко используются в лабораториях из-за невысокой стоимости и доступности реактивов. Наиболее широко в России используется метод определения белка с сульфосалициловой кислотой.

Колориметрические методы

Наиболее чувствительными и точными являются колориметрические методы определения общего белка мочи, основанные на специфических цветных реакциях белков.

К ним относятся:

биуретовая реакция,
метод Лоури,
методы, основанные на способности различных красителей образовывать комплексы с белками:
- Понсо S (Ponceau S),
- Кумасси бриллиантовый синий (Coomassie Brilliant Blue)
- пирогаллоловый красный (Pyrogallol Red).

С точки зрения исполнителя, в повседневной работе лаборатории при большом потоке исследований биуретовый метод является неудобным из-за большого числа операций. В то же время, метод характеризуется высокой аналитической надежностью, позволяет определять белок в широком диапазоне концентраций и выявлять альбумин, глобулины и парапротеины со сравнимой чувствительностью, вследствие чего биуретовый метод рассматривают в качестве референтного и рекомендуют для сравнения других аналитических методов обнаружения белка в моче. Биуретовый метод определения белка в моче предпочтительно выполнять в лабораториях, обслуживающих нефрологические отделения, и использовать в тех случаях, когда результаты определения с помощью других методов представляются сомнительными, а также для определения величины суточной потери белка у нефрологических больных.

Метод Лоури, обладающий более высокой чувствительностью по сравнению с биуретовым методом, сочетает биуретовую реакцию и реакцию Фолина на аминокислоты тирозин и триптофан в составе белковой молекулы. Несмотря на высокую чувствительность, данный метод не всегда обеспечивает получение надежных результатов при определении содержания белка в моче. Причиной тому служит неспецифическое взаимодействие реактива Фолина с небелковыми компонентами мочи (чаще всего аминокислотами, мочевой кислотой , углеводами). Отделение этих и других компонентов мочи путем диализа или осаждения белков позволяет с успехом использовать данный метод для количественного определения белка в моче. Некоторые лекарственные препараты – салицилаты, хлорпромазин, тетрациклины способны оказывать влияние на данный метод и извращать результаты исследования.

Достаточная чувствительность, хорошая воспроизводимость и простота определения белка по связыванию красителей делают эти методы перспективными, однако высокая стоимость реактивов препятствует более широкому их использованию в лабораториях. В настоящее время в России все большее распространение получает метод с пирогаллоловым красным.

Проводя исследование уровня протеинурии, нужно иметь ввиду, что различные методы определения протеинурии имеют разную чувствительность и специфичность к многочисленным белкам мочи.

протеинурия = 0,4799 B + 0,5230 L;
протеинурия = 1,5484 B – 0,4825 S;
протеинурия = 0,2167 S + 0,7579 L;
протеинурия = 1,0748 P – 0,0986 B;
протеинурия = 1,0104 P – 0,0289 S;
протеинурия = 0,8959 P + 0,0845 L;

где:
B – результат измерения с Кумасси G-250;
L - результат измерения с реактивом Лоури;
P - результат измерения с молибдатом пирогаллола;
S - результат измерения с сульфосалициловой кислотой.

Учитывая выраженные колебания уровня протеинурии в различное время суток, а также зависимость концентрации белка в моче от диуреза, различное его содержание в отдельных порциях мочи, в настоящее время при патологии почек принято оценивать выраженность протеинурии по суточной потере белка с мочой, то есть определять так называемую суточную протеинурию. Она выражается в г/сут.

При невозможности сбора суточной мочи рекомендуется определять в разовой порции мочи концентрации белка и креатинина. Поскольку скорость выделения креатинина в течение дня достаточно постоянна и не зависит от изменения скорости мочеотделения, отношение концентрации белка к концентрации креатинина постоянно. Данное отношение хорошо коррелирует с суточной экскрецией белка и, следовательно, может использоваться для оценки выраженности протеинурии. В норме отношение белок/креатинин должно быть менее 0,2. Белок и креатинин измеряют в г/л. Важным достоинством метода оценки выраженности протеинурии по соотношению белок-креатинин является полное исключение ошибок, связанных с невозможностью или неполным сбором суточной мочи.

Литература:

О. В. Новоселова, М. Б. Пятигорская, Ю. Е. Михайлов, "Клинические аспекты выявления и оценки протеинурии", Справочник заведующего КДЛ, № 1, январь 2007 г.
А. В. Козлов, "Протеинурия: методы ее выявления", лекция, Санкт-Петербург, СПбМАПО, 2000 г.
В. Л. Эмануэль, «Лабораторная диагностика заболеваний почек. Мочевой синдром», - Справочник заведующего КДЛ, № 12, декабрь 2006 г.
В.И. Пупкова, Л.М. Прасолова - Определение белка в моче и спинномозговой жидкости. Кольцово, 2007 г.
Справочник по клиническим лабораторным методам исследования. Под ред. Е. А. Кост. Москва, "Медицина", 1975 г.

Небольшое количество белка в суточной моче обнаруживается и у вполне здоровых лиц, однако такие небольшие концентрации не выявляют в разовых порциях используемыми в настоящее время методами. Приблизительно 70% белков мочи здорового человека приходится на долю уромукоида - белка, являющегося продуктом почечной ткани; таким образом, доля гломерулярного белка в моче здоровых людей является ничтожно малой и протеинурия в норме составляет 50-150 мг/сут, причем большинство белков мочи идентично сывороточным.

Принято различать следующие формы протеинурии в зависимости от места возникновения: преренальную, связанную с усиленным распадом белка тканей, выраженным гемолизом; ренальную, обусловленную патологией почек, которая может быть разделена на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей и чаще всего обусловленную воспалительной экссудацией.

В зависимости от длительности существования выделяют постоянную протеинурию, существующую в течение многих недель и даже лет, и преходящую, появляющуюся периодически, иногда даже при отсутствии патологии почек, например при лихорадке и выраженной интоксикации. Целесообразно различать вариабельность протеинурии: при суточной потере белка до 1 г - умеренную, от 1 до 3 г - среднюю и более 3 г - выраженную.

Обнаружение в моче белков с относительно большой молекулярной массой свидетельствует об отсутствии избирательности почечного фильтра и выраженном его поражении. В этих случаях говорят о низкой селективности протеинурии. Поэтому в настоящее время широкое распространение получило определение белковых фракций мочи. Наиболее точны методы электрофореза в крахмальном и полиакриламидном геле.
По результатам, полученным этими методами, можно судить о селективности протеинурии.

Большинство качественных и количественных методов определения белка в моче основаны на его коагуляции в объеме мочи или на границе сред (мочи и кислоты); если есть способ измерить интенсивность коагуляции, то проба становится количественной.

Унифицированная проба с сульфосалициловой кислотой:

Необходимый реактив:

20%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

Ход исследования:

В 2 пробирки наливают по 3 мл профильтрованной мочи. В опытную пробирку прибавляют 6-8 капель реактива. На темном фоне сравнивают контрольную пробирку с опытной. Помутнение в опытной пробирке указывает на наличие белка, пробу считают положительной.

Если реакция мочи щелочная, то перед исследованием ее подкисляют 2-3 каплями 10%-ного раствора уксусной кислоты.

Унифицированный метод Брандберга-Робертса-Стольникова:

В основу метода положена кольцевая проба Геллера, заключающаяся в том, что на границе азотной кислоты и мочи при наличии белка происходит его коагуляция и появляется белое кольцо.

Необходимый реактив:

30%-ный раствор азотной кислоты (относительная плотность 1,2) или реактив Ларионовой.
Приготовление реактива Ларионовой: 20-30 г хлорида натрия растворяют при нагревании в 100 мл дистиллированной воды, дают остыть, фильтруют. К 99 мл фильтрата приливают 1 мл концентрированной азотной кислоты.

Ход исследования:

В пробирку наливают 1-2 мл азотной кислоты (или реактива Ларионовой) и осторожно, по стенке пробирки, наслаивают такое же количество профильтрованной мочи. Появление тонкого белого кольца на границе двух жидкостей между 2 и 3-й минутой указывает на наличие белка в концентрации примерно 0,033 г/л. Если кольцо появляется раньше 2 мин после наслаивания, мочу следует развести водой и провести повторное наслаивание уже разведенной мочи. Степень разведения мочи подбирают в зависимости от вида кольца, т.е. его ширины, компактности и времени появления. При нитевидном кольце, появившемся ранее 2 мин, мочу разводят в 2 раза, при широком - в 4 раза, при компактном - в 8 раз и т.д. Концентрацию белка при этом вычисляют путем умножения 0,033 на степень разведения и выражают в граммах на 1 л (г/л).

Иногда белое кольцо получается при наличии больших количеств уратов. В отличие от белкового кольца уратное появляется немного выше границы между двумя жидкостями и растворяется при легком нагревании.

Количественное определение белка в моче по помутнению, образующемуся при добавлении сульфосалициловой кислоты:

Принцип метода:

Интенсивность помутнения при коагуляции белка сульфосалициловой кислотой пропорциональна его концентрации.

Необходимые реактивы:

1. 3%-ный раствор сульфосалициловой кислоты.

2. 0,9%-ный раствор хлорида натрия.

3. Стандартный раствор альбумина - 1%-ный раствор (1 мл раствора, содержащий 10 мг альбумина): 1 г лиофилизированного альбумина (из человеческой или бычьей сыворотки) растворяют в небольшом количестве 0,9%-ного раствора хлорида натрия в колбе вместимостью 100 мл, а затем доводят до метки тем же раствором. Реактив стабилизируют прибавлением 1 мл 5%-ного раствора азида натрия (NaN3). При хранении в холодильнике реактив годен в течение 2 месяцев.

Специальное оборудование - фотоэлектроколориметр.

Ход исследования:

В пробирку вносят 1,25 мл профильтрованной мочи, доливают до 5 мл 3%-ным раствором сульфосалициловой кислоты, перемешивают. Через 5 мин измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 590-650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против контроля в кювете длиной оптического пути 5 мм. Контролем служит пробирка, в которой к 1,25 мл профильтрованной мочи долили до 5 мл 0,9%-ный раствор хлорида натрия. Расчет ведут по калибровочному графику, для построения которого из стандартного раствора готовят разведения, как указано в таблице.

Из каждого полученного раствора берут 1,25 мл и обрабатывают, как опытные пробы.

Прямолинейная зависимость при построении калибровочного графика сохраняется до 1 г/л. При более высоких концентрациях пробу следует разводить и учитывать разведение при расчете.

Ложноположительные результаты могут быть получены при наличии в моче контрастных веществ, содержащих органический йод. Поэтому тест нельзя использовать у лиц, принимающих препараты йода; ложноположительный результат может быть также обусловлен приемом сульфаниламидных препаратов, больших доз пенициллина и при высоких концентрациях в моче мочевой кислоты.

Биуретовый метод:

Принцип метода:

Пептидные связи белка с солями меди в щелочной с образуют комплекс фиолетового цвета. Белки предварительно осаждают трихлоруксусной кислотой.

Необходимые реактивы:

1. 10%-ный раствор трихлоруксусной кислоты.
2. 20%-ный раствор меди (CuSO4∙5H2O).
3. 3%-ный раствор NaOH.

Ход исследования:

К 5 мл мочи, взятой из суточного количества, прибавляют 3 мл раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют до постоянного объема осадка. Надосадочную жидкость отсасывают пипеткой, осадок затем растворяют в 5 мл раствора NaОН. К раствору добавляют 0,25 мл CuSO4, смесь перемешивают и центрифугируют. Надосадочную жидкость фотометрируют при длине волны 540 нм в кювете с длиной оптического пути 10 мм против дистиллированной воды. Концентрацию белка рассчитывают по калибровочной кривой, при построении которой на оси ординат откладывают концентрацию белка (г/л), а на оси абсцисс - оптическую плотность в единицах экстинкции. По полученной концентрации рассчитывают суточную потерю белка с мочой.

С помощью индикаторной бумаги (полосок):

Белок может быть обнаружен с помощью индикаторной бумаги (полосок), которые выпускаются фирмами “Albuphan”, “Ames” (Англия), “Albustix”, “Boehringer” (Германия), “Comburtest” и др.

Принцип основан на феномене так называемой протеиновой ошибки некоторых кислотно-щелочных индикаторов. Индикаторная часть бумаги пропитана тетрабромфеноловым синим и цитратным буфером. При увлажнении бумаги буфер растворяется и обеспечивает соответствующий рН для реакции индикатора.

При 3,0-3,5 аминогруппы белков реагируют с индикатором и меняют его первоначально желтую окраску на зеленовато-синюю, после чего, сравнивая с цветной шкалой, можно ориентировочно оценить концентрацию белка в исследуемой моче. Основной предпосылкой правильной работы индикаторных полосок является обеспечение pH в диапазоне 3,0-3,5 для протекания реакции.

Если бумага находится в контакте с исследуемой мочой дольше экспозиции, указанной в инструкции, то цитратный буфер в ней растворяется, и тогда индикатор реагирует на истинный рН мочи, т.е. дает ложноположительную реакцию. В связи с тем, что емкость буфера ограничена, то даже при соблюдении методических указаний в пробах слишком щелочной мочи (pH > 6,5) получаются ложноположительные результаты, а в пробах слишком кислой мочи (рН
Число реагирующих аминогрупп в составе отдельных белков различно, поэтому альбумины реагируют в 2 раза интенсивнее, чем такое же количество γ-глобулинов (белок Бенс-Джонса, парапротеины), и гораздо интенсивнее, чем гликопротеиды. Однако при большом количестве слизи с высоким содержанием гликопротеидов (при воспалении мочевыводящих путей) оседающие на индикаторной полоске хлопья слизи могут давать ложноположительные результаты.

Чувствительность отдельных производственных серий индикаторной бумаги, равно как и отдельных видов бумаги, выпускаемых одной и той же фирмой, может быть различной, поэтому к количественной оценке белка этим методом следует относиться осторожно. Определение суточной потери белков с мочой при помощи индикаторной бумаги невозможно. Таким образом, индикаторная бумага уступает химическим пробам, в первую очередь пробе с сульфосалициловой кислотой, хотя и дает возможность быстрого исследования серии образцов.

Обнаружение в моче белка Бенс-Джонса:

Белок Бенс-Джонса может выделяться с мочой при миеломной болезни, макроглобулинемии Вальденстрема.

Исследование целесообразно проводить только при положительной пробе с сульфосалициловой кислотой. Индикаторная бумага для обнаружения белка Бенс-Джонса непригодна.

Принцип:

Основан на реакции термопреципитации. Методы, с помощью которых оценивают растворение белка Бенс-Джонса при температуре 100 °С или повторное осаждение при последующем охлаждении, ненадежны, так как далеко не все белковые тела Бенс-Джонса обладают соответствующими свойствами. Наиболее достоверно выявление этого парапротеина осаждением его при температуре 40-60 °С, но и в этих условиях осаждение может не произойти в слишком кислой (рН 6,5) моче, при низкой относительной плотности мочи и при низкой концентрации белка Бенс-Джонса.

Необходимый реактивы:

2 М ацетатный буфер рН 4,9.

Ход исследования:

Профильтрованную мочу в количестве 4 мл смешивают с 1 мл буфера и согревают в течение 15 мин на водяной бане при температуре 56 °С. При наличии белков Бенс-Джонса уже в течение 2 мин появляется выраженный осадок, при концентрации белка Бенс-Джонса менее 3 г/л проба может получиться отрицательной. На практике это встречается крайне редко, так как большей частью концентрация белка Бенс-Джонса в моче значительная.

С полной достоверностью белок Бенс-Джонса может быть обнаружен иммуноэлектрофоретическим исследованием при использовании специфических сывороток против тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.

Определение альбумоз (протеоз):

Альбумозы - это продукты расщепления белков, принцип определения которых основан на том, что они не сворачиваются при кипячении, но дают положительную биуретовую реакцию и высаливаются некоторыми солями, особенно сульфатом аммония и ацетатом цинка в кислой среде.

Нормальная моча альбумоз не содержит. Следы могут быть в нормальной моче в случае примеси семенной жидкости. В патологии альбумозы могут встречаться в моче при лихорадочных состояниях, переливании крови и плазмы, рассасывании экссудатов и транссудатов, распаде опухолей.

Необходимые реактивы:

1. Насыщенный раствор хлорида натрия.
2. Концентрированный раствор едкого натра.
3. Слабый раствор сульфата меди (почти бесцветный).

Ход исследования:

К моче, подкисленной уксусной кислотой, прибавляют насыщенный раствор хлорида натрия (1/3 объема), кипятят и горячую жидкость фильтруют. Альбумозы проходят в фильтрат, в котором их присутствие определяют биуретовой реакцией. К фильтрату прибавляют 1/2 объема концентрированного раствора едкого натра и несколько капель слабого раствора сульфата меди. При положительной пробе получается красно-фиолетовое окрашивание.

При положительной пробе с сульфосалициловой кислотой мочу нагревают. Если муть исчезает и вновь появляется при охлаждении, это означает, что моча содержит альбумозы или белковое тело Бенс-Джонса.

Инструкция

Качественные методы определения белка в моче : метод Геллера, проба с 20% раствором сульфосалициловой кислоты, проба с кипячением и др. Полуколичественные методы: использование диагностических тест-полосок для определения белка в моче , метод Брандберга-Робертса-Стольникова. Количественные методы: турбидиметрические и колориметрические.

Определение белка в суточной моче в концентрации 0,033 г/литр и более является патологией. Как правило, в утренней порции мочи концентрация белка не превышает 0,002 г/л, а в суточной моче концентрация белка составляет не более 50-150 мг белка.

Источники:

определение белка в моче

Моча является продуктом обмена веществ человека. Образуется она при фильтрации крови в почках, именно поэтому состав мочи дает четкую характеристику состояния организма человека.

Моча представляет собой сложный раствор, состоящий более чем из 150 соединений. Некоторые специфические вещества, например, ацетон, желчные кислоты, белок, глюкоза могут присутствовать только при определенных болезнях.

Для контроля над здоровьем человека, в первую очередь, необходимо определять количество мочи. Нормой считается образование 1-1,8 л мочи за сутки. Когда выделяется более 2 литров мочи - это является признаком возможного нарушения в работе почек, сахарного диабета и ряда других заболеваний. Если же в сутки образуется менее 0,5 литра мочи, существует закупорка мочеточника или мочевого пузыря.

Цвет мочи

Цвет выделяемой мочи зависит от множества факторов, поэтому может изменяться, начиная от светло-желтого до оранжевого. На присутствие тех или иных оттенков могут повлиять некоторые продукты питания, а также принимаемые человеком лекарственные препараты.

После приема лекарственных препаратов моча может окрашиваться и приобретать красноватый оттенок. Если человек активно двигается, при этом у него выделяется большое количество пота, моча будет иметь интенсивно желтый цвет, как и при приеме средств типа «Нитроксолина» или «Биомицина».

Если человек не принимал никаких красящих продуктов питания и лекарств, но цвет его мочи отличается от обычного, можно заподозрить наличие в организме какого-либо заболевания. Например, при болезнях печени моча будет иметь темно-желтый или зеленоватый цвет.

Присутствие крови в выделяемой моче явно свидетельствует о присутствии камня в или о почечном кровотечении, если при этом наблюдается и болевой синдром.

Если затруднено мочеиспускание - это может говорить о воспалительном процессе, вызванном какой-либо инфекцией в мочевом пузыре. А вот грязная и мутная моча свидетельствует о тяжелых заболеваниях почек.

Белок в моче

В крови у человека белок отсутствует или его количество настолько мало, что не определяются при помощи лабораторных анализов. В случае выявления в моче белка, необходимо провести повторные анализы, так как он может присутствовать при утреннем пробуждении человека, а также после тяжелой физической работы или нагрузки у спортсменов.

Определить визуально, присутствует ли белок в моче или нет, на 100% невозможно. Можно лишь догадываться, когда в моче имеется большое количество беловатого цвета хлопьев.

Если белок в моче повторно обнаруживается, это указывает на наличие какого-либо заболевания почек. Воспалительные процессы, происходящие в них, провоцируют небольшое увеличение количества белка. Если же с мочой его выделяется более 2 грамм - это тревожный сигнал.

Пиелонефрит - это воспалительное заболевание, при котором поражаются почечная лоханка, чашечки и паренхима. В большинстве случаев причиной воспаления является бактериальная инфекция. Полное выздоровление возможно лишь при своевременной диагностике, поэтому при появлении симптомов а необходимо тщательное обследование.